玻璃器皿的清洗
在制備培養基的過(guò)程中，要使用一些玻璃器皿，如試管、三角瓶、培養皿、燒杯和吸管等。這些器皿在使用前都要根據不同的情況，經(jīng)過(guò)一定的處理，洗刷干凈。有的還要進(jìn)行包裝，經(jīng)過(guò)滅菌等準備就緒后，才能使用。
1、新購的玻璃器皿
除去包裝沾染的污垢后，先用熱肥皂水刷洗，流水沖凈，再浸泡于１～２％的工業(yè)鹽酸中數小時(shí)，使游離的堿性物質(zhì)除去，再以流水沖凈。對容量較大的器皿，如大燒瓶、量筒等，洗凈后注入濃鹽酸少許，轉動(dòng)容器使其內部表面均沾有鹽酸，數分鐘后傾去鹽酸，再以流水沖凈，倒置于洗滌架上將水空干，即可使用。
2、用過(guò)的玻璃器皿
凡確無(wú)病原菌或未被帶菌物污染的器皿，使用后可隨時(shí)沖洗，吸取過(guò)化學(xué)試劑的吸管，可先浸泡于清水中，待到一定數量后再集中進(jìn)行清洗。有可能被病原菌污染的器皿，必須經(jīng)過(guò)適當消毒后，將污垢除去，用皂液洗刷，再用流水沖洗干凈。若用皂液未能洗凈的器皿，可用洗液浸泡適當時(shí)間后再用清水洗凈。洗液的主要成份是重鉻酸鉀和濃流酸，其作用是將有機物氧化成可溶性物質(zhì)，以便沖洗。洗液有很強的腐蝕作用，使用時(shí)應特別小心，避免濺到衣服、身體和其他物品上。
培養基的類(lèi)型
在實(shí)驗室中配制的適合微生物生長(cháng)繁殖或累積代謝產(chǎn)物的任何營(yíng)養基質(zhì)，都叫做培養基（Media）。由于各類(lèi)微生物對營(yíng)養的要求不同，培養目的和檢測需要不同，因而培養基的種類(lèi)很多。我們可根據某種標準，將種類(lèi)繁多的培養基劃分為若干類(lèi)型。
一、根據組成物質(zhì)的化學(xué)成分是否*了解來(lái)區分，可以分為天然培養基、合成培養基和半合成培養基。
1）
干粉培養基是指利用各種動(dòng)、植物或微生物的原料，其成分難以確切知道。主要原料有麥芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麩皮、各種餅粉、馬鈴薯、牛奶、血清等。用這些物質(zhì)配成的培養基雖然不能確切知道它的化學(xué)成分，但一般來(lái)講，營(yíng)養是比較豐富的，微生物生長(cháng)旺盛，而且來(lái)源廣泛，配制方便，所以較為常用，尤其適合于配制實(shí)驗室常用的培養基。穩定性常受生產(chǎn)廠(chǎng)或批號等因素的影響。
2）干粉培養基是一類(lèi)化學(xué)成分和數量*知道的培養基，它是用已知化學(xué)成分的化學(xué)藥品配制而成，化學(xué)成分、重復性強，但價(jià)格昂貴，而微生物又生長(cháng)緩慢，所以它只適用于做一些科學(xué)研究，例如營(yíng)養、代謝的研究。
3）半合成培養基 在合成培養基中，加入某種或幾種天然成分；或者在天然培養基中，加入一種或幾種已知成分的化學(xué)藥品即成半合成培養基。例如馬鈴薯蔗糖培養基等，在生產(chǎn)實(shí)踐和實(shí)驗室中使用。
二、根據干粉培養基的物理狀態(tài)來(lái)區分，可以分為固體液體培養基和半固體培養基。
?。保┧渲频呐囵B基是液態(tài)的，其中的成分基本上溶于水，沒(méi)有明顯的固形物，液體培養基營(yíng)養成分分布均勻，易于控制微生物的生長(cháng)代謝狀態(tài)。
2） 在液體培養基中加入適量的凝固劑即成固體培養基。常用作凝固劑的物質(zhì)有瓊脂、明膠、硅膠等，以瓊脂為常用。固體培養基在實(shí)際中用得十分廣泛。在實(shí)驗室中，它被用作微生物的分離、鑒定、檢驗雜菌、計數、保藏、生物測定等。
3）如果把少量的凝固劑加入到液體培養基中，就制成了半固體培養基。以瓊脂為例，它的用量在0.2~1%之間。這種培養基有時(shí)可用來(lái)觀(guān)察微生物的動(dòng)力，有時(shí)用來(lái)保藏菌種。
三、根據用途來(lái)區分，可分為選擇、增殖和鑒別培養基。
1）在培養基中加入某種物質(zhì)以殺死或抑制不需要的菌種生長(cháng)，稱(chēng)之為選擇培養基。如鏈霉素、氯霉素等抑制原核微生物的生長(cháng)；而制霉菌素、灰黃霉素等能抑制真核微生物的生長(cháng)；結晶紫能抑制革蘭氏陽(yáng)性細菌的生長(cháng)等。
2）在自然界中，不同種的微生物常生活在一起，為了分離我們所需要的微生物，在普通培養基中加入一些某種微生物特別喜歡的營(yíng)養物質(zhì)，以增加這種微生物的繁殖速度，逐漸淘汰其它微生物，這種培養基稱(chēng)為增殖培養基，常用于菌種篩選和選擇增菌中。
3）在培養基中加入某種試劑或化學(xué)藥品，使難以區分的微生物經(jīng)培養后呈現出明顯差別，因而有助開(kāi)快速鑒別某種微生物。這樣的培養基稱(chēng)之為鑒別培養基。例如用以檢查飲水和乳品中是否含有腸道致病菌的伊紅美藍培養基就是一種常用的鑒別性培養基。
有些是具有選擇和鑒別雙重作用。例如食品檢驗中常用的麥康凱是一例。它含有膽鹽、乳糖和中性紅。膽鹽具有抑制腸道菌以外的細菌的作用（選擇性），乳糖和中性紅（指示劑）能幫助區別乳糖發(fā)酵腸道菌（如大腸桿菌）和不能發(fā)酵乳糖的腸道致病菌（如沙門(mén)氏菌和志賀氏菌）。
另外，根據營(yíng)養成分是否“*”，可以分為基本培養基、*培養基和補充培養基，這類(lèi)術(shù)語(yǔ)主要是用在微生物遺傳學(xué)中。根據生產(chǎn)的目的來(lái)區分，可以分為種子和發(fā)酵培養基。還有專(zhuān)門(mén)用于培養病毒等寄生微生物的活組織培養基，如雞胚等；專(zhuān)門(mén)用于培養自養微生物的無(wú)機鹽培養基等。
三、干粉培養基制備的基本方法和注意事項
1、培養基配方的選定
同一種配方在不同著(zhù)作中常會(huì )有某些差別。因此，除所用的是標準方法，應嚴格按其規定進(jìn)行配制外，一般均應盡量收集有關(guān)資料，加以比較核對，再依據自己的使用目的，加以選用，記錄其來(lái)源。
2、培養基的制備記錄
每次制備均應有記錄，包括名稱(chēng)，配方及其來(lái)源，和各種成份的牌號，終pH值、消毒的溫度和時(shí)間制備的日期和制備者等，記錄應復制一份，原記錄保存備查，復制記錄隨制好的培養基一同存放、以防發(fā)生混亂。
3、培養基成分的稱(chēng)取
成分必須稱(chēng)取并要注意防止錯亂，一次完成，不要中斷?？蓪⑴浞街糜诎鴤?，每稱(chēng)完一種成分即在配方面軍做出記號，并將所需稱(chēng)取的藥品一次取齊，置于左側，每種稱(chēng)取完畢后，即移放于右側。*稱(chēng)取完畢后，還應進(jìn)行一次檢查。
4、培養基各成份的混合和溶化
干粉培養基所用化學(xué)藥品均應是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養基中，使細菌不易生長(cháng)。使用不銹鋼鍋加熱溶化，可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動(dòng)蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時(shí)、可先用溫水加熱并隨時(shí)擾動(dòng)、以防焦化、如發(fā)現有焦化現象、該培養基即不能使用，應重新制備。待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分*溶化，迄至煮沸。如為瓊脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過(guò)程中，因蒸發(fā)而丟失的水分，必須加以補足。
5、培養基pH的初步調正
因培養基在加熱消毒過(guò)程中、pH會(huì )有所變化，培養基各成分*溶解后，應進(jìn)行PH的初步調正。例如，牛肉浸液約可降低pH0.2，而腸浸液pH卻會(huì )有顯著(zhù)的升高。因此，對這個(gè)步驟，操作者應隨時(shí)注意探索經(jīng)驗、以期能掌握培養基的PH，保證培養基的質(zhì)量。PH調整后，還應煮沸數分鐘，以利培養基沉淀物的析出。
6、培養基的過(guò)濾澄清
液體培養基必須澄清，瓊脂培養基也應透明無(wú)顯著(zhù)沉淀，因此，須要采用過(guò)濾或其它澄清方法以達到此項要求。一般可用濾紙過(guò)濾法，濾紙應折疊成折扇或漏斗形，以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。
瓊脂培養基可用清潔的白色薄絨布趁熱過(guò)濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過(guò)濾。新制肉、肝、血和土豆等浸液時(shí)、則須先用絨布將碎渣濾去，再用濾紙反復過(guò)濾。如過(guò)濾法不能達到澄清要求、則須用蛋清澄清法。即將冷卻至55~60°C的培養基放入大的三角燒瓶?jì)?，裝入量不得超過(guò)燒瓶容量的1/2，每1000ml培養基加入1~2個(gè)雞蛋的蛋白，強力振搖3~5分鐘，置高壓蒸汽滅菌器中、121°C加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過(guò)濾即可。
7、培養基的分裝
應按使用的目的和要求，分裝于試管、燒瓶等適當容器內。分裝量不得超過(guò)容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵，其外還須用防水紙包扎（現試管一般多有用螺旋蓋者）。分裝時(shí)能使用半自動(dòng)或電動(dòng)的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養基時(shí)，分裝量應以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當。分裝容器應預先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒，以利于培養基的*滅菌。每批培養基應另外分裝20ml培養基于一小玻璃瓶中，隨該批培養基同時(shí)滅菌，以為測定該批培養基pH之用。
8、培養基的滅菌
干粉培養基一般可采用121°C高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。在各種制備方法中，如無(wú)特殊規定，即可用此法滅菌。
某些畏熱成分，如糖類(lèi)，應另行配成20%或更高的濃液，以過(guò)濾或間歇滅菌法消毒，以后再用無(wú)菌操作技術(shù)、定量加于培養基。明膠培養基亦應用較低溫度滅菌。血液、體液和抗生素等則應以無(wú)菌操作技術(shù)抽取和加入于經(jīng)冷卻約50°C左右的培養基中。
瓊脂斜面培養基應在滅菌后立即取出，冷至55℃-60℃時(shí)，擺置成適當斜面，待其自然凝固。
9、培養基的質(zhì)量測試
每批制備好以后，應仔細檢查一遍，如發(fā)現破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養基沾染等、均應挑出棄去。并測定其終H。
將全部培養基放入36±1°C恒溫箱培養過(guò)夜，如發(fā)現有菌生長(cháng)，即棄去。
用有關(guān)的標準菌株接種1~2管或瓶培養基，培養24~48小時(shí)，如無(wú)菌生長(cháng)或生長(cháng)不好。應追查原因并重復接種一次，如結果仍同前，則該批培養基即應棄去，不能使用。
10、干粉培養基的保存
應存放于冷暗處，能放于普通冰箱內。放置時(shí)間不宜超過(guò)一周，傾注的平板培養基不宜超過(guò)3天。每批均必須附有該批培養基制備記錄副頁(yè)或明顯標簽。
掃一掃，關(guān)注微信
當前位置：