PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒說(shuō)明書(shū)

PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒說(shuō)明書(shū)

PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒是一種旨在通過(guò)使用PicoGreen熒光染料與樣品中雙鏈DNA的高度特異性結合而產(chǎn)生熒光信號來(lái)定量樣品中DNA含量的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、 成功實(shí)驗證明的。其適用于各種原核生物和真核生物的細胞或組織DNA以及環(huán)境中DNA含量分析。產(chǎn)品嚴 格無(wú)菌，即到即用，性能穩定，高度敏感。

技術(shù)背景:

作為 DNA 染色劑之一的 PicoGreen 熒光染料特異性地與樣品中雙鏈 DNA 結合，產(chǎn)生熒光信號。PicoGreen 技術(shù)可以檢測到低達 0.5 納克雙鏈 DNA 的變化。DNA 的微量增加引起熒光信號強度（Intensity）或相對熒 光單位（RFU）的顯著(zhù)增加。其自發(fā)熒光（Autofluorescence）忽略不計，重復性標準差異（Standard       Deviation） 低，不受樣品化學(xué)成分的干擾。

產(chǎn)品內容：

染色液（Reagent A）  微升

稀釋液（Reagent B）  毫升

標準液（Reagent C）  毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1 份

保存方式：

保存 染色液（Reagent A）和 標準液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里， 染色液（Reagent A）避免光照，有效保證6個(gè)月

用戶(hù)自備1.5 毫升離心管：用于工作液配制的容器比色皿或 96 孔板：用于熒光分析的容器 熒光分光光度儀或熒光酶標儀：用于熒光定量分析

PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒實(shí)驗步驟：

一、 測定準備：

1．準備好待測樣品，置于冰槽里

2．設定好熒光分光光度儀（溫度為 37℃）：激發(fā)波長(cháng) 480nm，散發(fā)波長(cháng) 530nm，并置零

3．實(shí)驗開(kāi)始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的 染色液（Reagent A）置于冰槽里融化。然后移出 xx 毫升 稀釋液（Reagent B）到新的 1.5 毫升離心管，加入 xx 微升 染色液（Reagent A），混勻后，用錫紙包裹，標記為染色工作液，放在暗室里。然后進(jìn)行下列操作。

二、 構建標準曲線(xiàn)：

1．準備好 5 個(gè) 1.5 毫升離心管，標記為 1 至 5 號管

2．分別加入 xx 微升 稀釋液（Reagent B）到每個(gè)離心管

3．移取 xx 微升 標準液（Reagent C）到 1 號管，混勻

4. 小心移取 xx 微升 1 號管稀釋的 標準液（Reagent C）到 2 號管，混勻

5．小心移取 xx 微升 2 號管稀釋的 標準液（Reagent C）到 3 號管，混勻

6. 小心移取 xx 微升 3 號管稀釋的 標準液（Reagent C）到 4 號管，混勻

7．將 1 至 5 號管放進(jìn)冰槽里備用；標準管含量見(jiàn)下表：

8．移取 xx 微升含有 染色液（Reagent A）和 稀釋液（Reagent B）的 染色工作液到新的比色皿

9．加入 500 微升上述配制的標準液

10．室溫下，孵育 5  分鐘，避免光照

11．即刻放進(jìn)熒光分光光度儀測讀：獲得相對熒光單位（Relative   Fluorescence    Unit；RFU）

12.重復實(shí)驗步驟 8 至 11 四次

13.繪制標準曲線(xiàn)：縱座標（Y  軸）為相對熒光單位（RLU）；橫坐標（X  軸）為 DNA  含量（微克）

三、 樣品檢測

1．移取 xx 微升含有 染色液（Reagent A）和 稀釋液（Reagent B）的 染色工作液到新的比色皿

2．加入 500 微升待測樣品

3．室溫下，孵育 5 分鐘，避免光照

4.即刻放進(jìn)熒光分光光度儀測讀：獲得相對熒光單位（Relative   Fluorescence   Unit；RFU）

5．根據標準曲線(xiàn)獲得樣品對應 DNA 含量（微克）

6．樣品實(shí)際 DNA 濃度：

PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒注意事項：

1．本產(chǎn)品為 20 次（比色皿）和 100 次（96 孔板）操作，包括標準曲線(xiàn)測定

2．操作時(shí)，須戴手套

3．使用新鮮配制的 染色工作液，務(wù)必不要超過(guò) 2 小時(shí)，且注意避光

4．建議使用塑料管配制 染色工作液，而不是玻璃制品

5．孵育時(shí)，避免光照

6．系統檢測，標準曲線(xiàn)測定 1 次即可；如果儀器更換，則需要重新測定 1 次

7．如果熒光讀數過(guò)高，可以相應稀釋樣品量

8．可以使用熒光酶標儀檢測，試劑用量和體系均除以 5，包括標準 DNA 含量，其計算公式[根據標準曲線(xiàn)獲得樣品對應DNA  濃度（微克）X樣品稀釋倍數]÷0.1（樣品容量；毫升）＝微克/毫升

9．鹽類(lèi)、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白、瓊脂糖、單鏈 DNA 和 RNA 不會(huì )干擾檢測

10.本公司提供系列DNA檢測試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準：

1．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩定

2.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定高度敏感

使用承諾:

上海滬崢秉著(zhù)“信譽(yù)至上、客戶(hù)滿(mǎn)意、質(zhì)量承諾”的宗旨為我們的用戶(hù)提供產(chǎn)品和服務(wù)。用戶(hù)收到貨后，應按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)上的規定妥善保管并在有效期內使用。我們的產(chǎn)品在銷(xiāo)售前已作嚴格的質(zhì)量鑒定，保證 說(shuō)明書(shū)所述的使用效果。在貨到后10天內若發(fā)現確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問(wèn)題，請立即以書(shū)面形式（實(shí)驗報告）與本公司，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負責更換產(chǎn)品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔由此造成的損失。