人非小細胞肺癌細胞；A549 ，*

人非小細胞肺癌細胞；A549 ，*
細胞介紹
該細胞系由D.J.Griad通過(guò)肺癌組織移植培養建系，患者為58歲白人男性。A549能通過(guò)胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂。
 
細胞特性

1. 來(lái)源：肺癌
2. 形態(tài)：上皮細胞樣
3. 含量：>1x10⁶ 個(gè)/mL
4. 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5. 規格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

 
運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；（2）存活細胞，收到后應繼續生長(cháng)，傳代達到細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。
 
細胞用途：僅供科研使用。
                      
人非小細胞肺癌細胞；A549 ，*培養步驟
一．培養基及培養凍存條件準備：

1. 準備DMEM培養基（DMEM,GIBCO,貨號12800017，添加NaHCO3 1.5g/L)
2. 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3. 凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
   • 細胞處理：
4. 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
5. 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
6.  

1.      棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.      加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3.      按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4.      將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。貼壁細胞凍存時(shí)，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
 
注意事項：
1. 收到細胞后，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。