人SV40轉染成骨細胞HFOB1.19性能參數科研

人SV40轉染成骨細胞HFOB1.19性能參數科研

在進(jìn)行細胞傳代培養的時(shí)候，胰蛋白酶作用的時(shí)間是在1～3分鐘，由于我有好幾個(gè)培養瓶（4個(gè)以上）的細胞都需要進(jìn)行傳代操作，那么就胰酶消化這一步而言，我是該一個(gè)培養瓶一個(gè)培養瓶這么分開(kāi)做，還是可以幾個(gè)同時(shí)做呢？同時(shí)做我怕后來(lái)操作的培養瓶中的細胞消化過(guò)度??！一個(gè)一個(gè)的做會(huì )不會(huì )又太費時(shí)呢？

培養基 D-MEM/F-12培養基(GIBCO,貨號12400024，添加L-glutamine 150mg/L, NaHCO3 1.5g/L)，90%；0.3mg/ml G418；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：33.5攝氏度。
生長(cháng)特性 貼壁生長(cháng)

1、一個(gè)一個(gè)做！防止污染，和消化細胞時(shí)間的不均勻。

2、原則上，為了避免細胞系之間的污染，應該一個(gè)一個(gè)的做。但是如果你能保證無(wú)菌操作的原則，人SV40轉染成骨細胞HFOB1.19性能參數科研也能把握好各種貼壁細胞系消化的時(shí)間，是可以同時(shí)做，這樣效率高。建議你剛開(kāi)始一個(gè)一個(gè)的做，熟練以后根據具體情況決定如何做。

3、4個(gè)可以同時(shí)做，時(shí)間到了用移液槍給4個(gè)瓶加含血清的培養基終止就行。

4、新手的話(huà)強烈建議一個(gè)一個(gè)處理細胞，特別是消化，除非你養的細胞對消化都不敏感，不然很容易消化過(guò)度或者不到位。另外同時(shí)處理多個(gè)細胞容易出現細胞間交叉污染，一旦污染基本沒(méi)救，比細菌污染還要麻煩。

5、剛開(kāi)始還是一個(gè)一個(gè)來(lái)，人SV40轉染成骨細胞HFOB1.19性能參數科研消化的時(shí)間與細胞的來(lái)源有很大關(guān)系，貼壁性強的細胞，需要消化的時(shí)間較長(cháng)。一般除了貼壁性強的癌細胞外，細胞消化時(shí)間1-3min，還有胰蛋白酶的濃度有關(guān)系，濃度高的消化時(shí)間要短一些，不然會(huì )消化過(guò)了，對于細胞的生長(cháng)不好。你可以在分散打入胰蛋白酶時(shí)，輕晃培養瓶，在顯微鏡下看見(jiàn)細胞開(kāi)始變亮，皺縮，卷邊的時(shí)候就加入培養液或者血清終止消化。

失敗的關(guān)鍵原因還是細胞復蘇的時(shí)候沒(méi)有迅速解凍的緣故，后一次成功是因為注意到這個(gè)問(wèn)題。細胞的復蘇及凍存遵循慢凍速融原則，如果hFOB 1.19人SV40轉染成骨細胞取出后沒(méi)有在盡可能短的時(shí)間里解凍的話(huà)細胞內部會(huì )產(chǎn)生很多冰晶對細胞就有致命的損失了。另外，細胞的確應該是在液氮條件下保存，如果液氮可以保存1-2年的細胞，放-80度保存恐怕不到三個(gè)月就不行了，并且狀態(tài)會(huì )很差。ZYC3821    神經(jīng)前體細胞培養基    NPrCM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3822     神經(jīng)細胞培養基    NM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3823     少突膠質(zhì)前體細胞培養基    OPCM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3824     球狀少突細胞培養基    OsM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3825     角質(zhì)細胞培養基    KM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3826     角質(zhì)細胞培養基（確定）     KM-d    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3827    成纖維細胞培養基    FM-sf    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3828    扁桃體上皮細胞培養基    TEpiCM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3829     口腔角質(zhì)細胞培養基    OKM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3830    結腸上皮細胞培養基    CoEpiCM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3831     支氣管上皮細胞培養基    BEpiCM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 

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使用權限 A類(lèi)注意事項：
1. 收到細胞后首先觀(guān)察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發(fā)生請及時(shí)和我們。
2. 仔細閱讀細胞說(shuō)明書(shū)，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀(guān)察細胞狀態(tài)。因運輸問(wèn)題貼壁細胞會(huì )有少量從瓶壁脫落，將細胞置于培養箱內靜置培養過(guò)夜，隔天再取出觀(guān)察。此時(shí)多數細胞均會(huì )貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實(shí)細胞活力正常，請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養；如果染色結果顯示細胞無(wú)活力，請拍下照片及時(shí)和我們，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。
4. 請客戶(hù)用相同條件的培養基用于細胞培養。培養瓶?jì)榷嘤嗟呐囵B基可收集備用，細胞傳代時(shí)可以一定比例和客戶(hù)自備的培養基混合，使細胞逐漸適應培養條件;建議直接購買(mǎi)提供的*培養基。
5. 建議客戶(hù)收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通交流。
培養溫馨提示：
1）公司努力實(shí)現為科學(xué)研究提供實(shí)驗細胞技術(shù)服務(wù)。所提供的實(shí)驗細胞及其子代，不能用于人體實(shí)驗和臨床診斷、治療。
2）公司細胞資源中心承諾盡zui大努力對實(shí)驗細胞資源相關(guān)信息進(jìn)行及時(shí)更新。但限于我們的技術(shù)條件，中心不保證其準確性。
3）從文獻等處引用的信息本中心未進(jìn)行核實(shí)，僅供參考。
 

 
注意事項：
1. 收到細胞后，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。