如何作好軟瓊脂實(shí)驗分析

軟瓊脂(soft agar)實(shí)驗一般用來(lái)檢測細胞的集落形成能力?，F在這種方法越來(lái)越多的用于分離癌細胞，也可以用來(lái)確認癌細胞是否具有癌化特性，為進(jìn)一步做腫瘤小鼠移植模型奠定理論基礎。該方法看似簡(jiǎn)單，但如果細節掌握不好，往往導致實(shí)驗失敗或數據缺乏說(shuō)服力。如果你曾經(jīng)在這個(gè)實(shí)驗上栽了跟頭，請不妨在如下幾個(gè)方面進(jìn)行嘗試：

1.要確保在整個(gè)實(shí)驗過(guò)程中所使用的瓊脂處于*液體狀態(tài)（>80℃），尤其是在做基底時(shí)，如果瓊脂凝固過(guò)快會(huì )導致基底不均一；

2. 做瓊脂基底是應避免產(chǎn)生小氣泡，一旦有小氣泡產(chǎn)生，應該立即將氣泡趕走；

3. 應使用2倍濃度的培養基，并加入20%FBS 和2%的P/S；

4. 在制備上層時(shí)，混合液體需要有順序，一般為在同一個(gè)移液管中先吸取液態(tài)瓊脂，再吸取同體積的2倍濃度的培養基，后在吸取2倍體積的細胞懸液，這樣既可以保證瓊脂不立即固化，又可以有效避免細胞因溫度過(guò)高而燙死；

5. 因為該實(shí)驗周期較長(cháng)，為避免過(guò)度蒸發(fā)而導致瓊脂裂解，需要保證小環(huán)境持久濕潤，一般可在六孔板或培養皿下面墊上三到四層濕潤的薄紙。