如何看懂流式結果圖

流式結果圖有4種類(lèi)型，分別為:1. 直方圖  2.散點(diǎn)圖  3. 等高線(xiàn)圖  4.密度圖

下面一一為大家介紹

1. 直方圖（Histograms）

a.橫坐標代表熒光信號或散射光信號相對強度，可以是線(xiàn)性或對數坐標。

b.縱坐標一般是相對細胞數。

直方圖適用于分析處理周期（如下圖）

直方圖分析數據注意事項：

① 不能比較不同標記之間的表達量。如一號樣本單標記CD133、二號樣本單標記CD44，那么CD133與CD44表達量不能用直方圖進(jìn)行比較。

② 直方圖的形狀（直方圖的高度及寬度）取決于儀器的類(lèi)型、處理軟件和樣本

③檢測目的細胞非常少（即檢測的細胞在一個(gè)細胞群體中所占的比例特別少），因此需要統計大量的數據，直方圖將會(huì )將該稀有細胞覆蓋，如下圖散點(diǎn)圖中的P2門(mén)為CD16陰性群體，但在直方圖中則幾乎看不出來(lái)，所以此時(shí)散點(diǎn)圖為展示數據方式。

2. 散點(diǎn)圖（Dot plots）

散點(diǎn)圖是雙變量圖的基本圖形，相對于單參數直方圖其分析通量更高，同時(shí)也能更好觀(guān)察到較小比例細胞群，參見(jiàn)直方圖注意事項2，另外散點(diǎn)圖中設門(mén)后，可以賦予門(mén)控顏色，便于觀(guān)察門(mén)控細胞群在其他圖中的分布，比如下圖只賦予淋巴細胞門(mén)紅色，則可以觀(guān)察到淋巴細胞中在散射光圖中的分布。

橫坐標和縱坐標都是光信號，十字門(mén)左下角是雙陰性群，右下角和左上角是單陽(yáng)群，右上角是雙陽(yáng)群。散點(diǎn)圖上的每一個(gè)點(diǎn)可以代表某一個(gè)細胞的信息。

但是散點(diǎn)圖在顯示足夠多events下的細胞分群上缺乏細節，如下圖，流式儀器記錄的events達到50000以上時(shí)，CCR7的陽(yáng)性群與陰性群已經(jīng)沒(méi)有明顯界限，但當用等高線(xiàn)圖或者密度圖時(shí)，明顯改善點(diǎn)圖存在的缺點(diǎn)。

3.密度圖（Density plot）

密度圖不僅能夠表示一個(gè)標記的表達水平，還能顯示給定區域中事件的相對數量（密度）。有三種密度圖。密度度、斑馬線(xiàn)圖、偽彩圖。選擇自己一種喜歡的應用

4.等高線(xiàn)圖（Contour plots）

等高線(xiàn)圖是另一顯示數據密度的形式。該圖使用等高線(xiàn)顯示數據的相對強度。等高線(xiàn)的每條線(xiàn)包含events的百分比由所用軟件的等高線(xiàn)圖決定。單純的等高線(xiàn)圖不能顯示低密度的群體顆?；蛘弋惓Ｖ?，比較好的策略為等高線(xiàn)圖與點(diǎn)圖結合起來(lái)使用，比如下圖左邊為點(diǎn)圖，中間為等高線(xiàn)圖，左邊為等高線(xiàn)加點(diǎn)圖。

分析，建議用散點(diǎn)圖用直方圖不能說(shuō)錯，但這需要在沒(méi)有自發(fā)熒光或自發(fā)熒光低、熒光滲漏調整到位的情況下。而在實(shí)際檢測中，自發(fā)熒光總是難以避免，更不用說(shuō)現在多色流式中熒光滲漏對通道的干擾。

通過(guò)下面這個(gè)圖可以明顯看出，在直方圖上，自發(fā)熒光造成的拖尾，使得你的陰陽(yáng)性分界位置難以確定，即使GFP樣本能夠形成雙峰，但實(shí)際上雙峰分界位置同時(shí)包括了自發(fā)熒光假陽(yáng)性信號、陽(yáng)性群弱表達信號，這兩部分信號數量一樣的時(shí)候，這個(gè)位置恰好相互抵消，但如果不一樣的，這個(gè)比例就不準確了，如果改用下面的散點(diǎn)圖，用不規則門(mén)（如下面的梯形門(mén)），就可以準確圈出陽(yáng)性群，呈現更真實(shí)的比例：

綜上，不同類(lèi)型的流式圖各有優(yōu)缺點(diǎn)，適用于不同類(lèi)型的檢測。