如何使用大鼠ELISA試劑盒做實(shí)驗？按照這7個(gè)步驟操作準沒(méi)問(wèn)題！
更新時(shí)間：2020-12-25 點(diǎn)擊次數：1720
大鼠ELISA試劑盒-大鼠成纖維細胞生長(cháng)因子是經(jīng)我司專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人員檢定并得到國內各大高校實(shí)驗團隊，課題組認可的科研用ELISA試劑盒，該產(chǎn)品靈敏度高，特意性強，檢測測定樣本的結果穩定準確，做科研實(shí)驗找我們就對了。
大鼠ELISA試劑盒實(shí)驗步驟：
1.標本的采取和保存:
可用作ELISA測定的標本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進(jìn)行測定（如血清、尿液），有些則需經(jīng)預處理（如糞便和某些分泌物）。大部分ELISA檢測均以血清為標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。制備血漿標本需借助于抗凝劑，而血清標本只要待血清自然凝固、收縮后即可取得。除特殊情況外，在醫學(xué)檢驗中均以血清作為檢測標本。在ELISA中血漿和血清可同等應用。血清標本可按常規方法采集，應注意避免溶血，紅細胞溶解時(shí)會(huì )釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標記的ELISA測定中，溶血標本可能會(huì )增加非特異性顯色。
2.試劑的準備:
按試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求準備實(shí)驗中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應用pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時(shí)放回冰箱保存。
3.加樣:
在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶結合物，加底物。加樣時(shí)應將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。加標本一般用微量加樣器，按規定的量加入板孔中。每次加標本應更換吸嘴，以免發(fā)生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定（如間接法ELISA）需用稀釋的血清，可在試管中按規定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液，再在其中加入血清標本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結合物應用液和底物應用液時(shí)可用定量多道加液器，使加液過(guò)程迅速完成。
4:保溫:
在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶結合物后?？乖贵w反應的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過(guò)程稱(chēng)為溫育(incubation)，有人稱(chēng)之為孵育，在ELISA中似不恰當。ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會(huì )，只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐步平衡的過(guò)程，因此需經(jīng)擴散才能達到反應的終點(diǎn)。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么ELISA反應總是需要一定時(shí)間的溫育。
5.洗滌:
洗滌在ELISA過(guò)程中雖不是一個(gè)反應步驟，但卻也決定著(zhù)實(shí)驗的成敗。ELISA是靠洗滌來(lái)達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒(méi)能與固相抗原或抗體結合的物質(zhì)，以及在反應過(guò)程中非特異性地吸附于固相。
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