核糖核酸酶采用的技術(shù)指導(dǎo)工作

 

　　核糖核酸酶特點(diǎn)：

 

　　1. 特異性強(qiáng)：只對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行有效識(shí)別和殺滅，而不傷害正常組織和細(xì)胞,抗瘤譜廣。

 

　　2. 對(duì)體內(nèi)各種腫瘤細(xì)胞均能有效治療。

 

　　3.安全性好，除可能出現(xiàn)的發(fā)熱、少量出血外，無其他不良反應(yīng)

 

　　4.本產(chǎn)品具有良好的增殖和分化潛能，可分化為骨細(xì)胞，脂肪細(xì)胞，軟骨細(xì)胞等，流式檢測(cè)結(jié)果顯示，CD29，CD44，CD105陽性，CD35，CD45陽性

 

　　核糖核酸酶傳代說明：

 

　　(一)如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

 

　　(二)如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)，具體步驟如下：

 

　　1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

 

　　2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，之后翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶10-30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化。

 

　　3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加*培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明，收到細(xì)胞后的*次傳代一般是一傳二。

 

　　細(xì)胞經(jīng)過嚴(yán)格的控制（從組織來源、實(shí)驗(yàn)室條件等方面），人正常肝細(xì)胞；L-02純度可達(dá)98％。不同的細(xì)胞傳代次數(shù)不一。多數(shù)細(xì)胞種類是從胚胎提取，于原代（或二代）凍存在液氮中。細(xì)胞采用干冰運(yùn)輸，客戶收到細(xì)胞后，從干冰中取出放入液氮中保存，待實(shí)驗(yàn)安排好后，解凍后即可以進(jìn)行復(fù)蘇培養(yǎng)。公司實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞、培養(yǎng)基都是經(jīng)過嚴(yán)格檢驗(yàn)，分離、配制而成，產(chǎn)品質(zhì)量過硬。

 

　　運(yùn)輸與保存：本品使用10%DMSO凍存液冷凍，采用干冰保存運(yùn)輸，收到細(xì)胞后，如果不立即復(fù)蘇，請(qǐng)將細(xì)胞放入液L-02人正常肝細(xì)胞；L-02復(fù)蘇方法：取出凍存管后，投入37 ℃水浴中，震蕩解凍2 min，酒精消毒管壁外側(cè)后，將其轉(zhuǎn)入超凈臺(tái)中，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中，加入5 ml 37 ℃預(yù)熱的培養(yǎng)基，并清洗凍存管一次，將離心管離心（1000 rpm，5 min），棄去上清液，再加入2 ml培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。核糖核酸酶雖然有些粘蛋白是膜 -被結(jié)合由于存在疏水性有利于保持在跨膜域質(zhì)膜，大多數(shù)粘蛋白被分泌到粘膜表面或分泌成為一個(gè)組件唾液。

 

　　在核糖核酸酶中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括:

 

　　1、固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

 

　　2、包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml。

 

　　3、酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接核糖核酸酶9001-99-4法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。