有關(guān)胎牛血清經(jīng)常會(huì )碰到的問(wèn)題解答

　　1、保存血清的方法?

　　我們建議胎牛血清應保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃時(shí)，請勿超過(guò)一個(gè)月。若您一次無(wú)法用完一瓶，建議您無(wú)菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。

　　2、如何解凍胎牛血清才不會(huì )使產(chǎn)品質(zhì)量受損?

　　我們建議您將胎牛血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過(guò)程中必須規則地搖晃均勻。

　　3、胎牛血清解凍后發(fā)現有絮狀沉淀物出現，該如何處理?

　　血清中沉淀物的出現有許多種原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白在血清解凍后，也會(huì )存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。

　　若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內，以400g稍微離心,上清液即可接著(zhù)加入培養基內一起過(guò)濾。我們不建議您以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會(huì )阻塞您的過(guò)濾膜。

　　4、為什么要熱滅活血清?

　　加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學(xué)研究，培養ES細胞，昆蟲(chóng)細胞和平滑肌細胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。

　　5、有必要做熱滅活嗎?

　　實(shí)驗顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對細胞的生長(cháng)只有微小的促進(jìn)，或*沒(méi)有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長(cháng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì )顯著(zhù)的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀(guān)察，像是“小黑點(diǎn)”，常常會(huì )讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì )使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。

　　因此我們建議您，若非必須，您可以不需要做熱處理這一步。如此一來(lái)，不但節省您寶貴的時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量！

　　6、為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會(huì )出現沉淀？

　　GIBICO的胎牛血清 沒(méi)有預老化，儲存在2－8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。這應該不會(huì )影響血清的質(zhì)量。推薦在－20℃儲存胎牛血清，避免反復凍融。

　　7、如何避免沉淀物的產(chǎn)生?

　　我們建議您在使用血清的時(shí)候，注意下列的操作: • 解凍血清時(shí)，請按照所建議的逐步解凍法，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實(shí)驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。

　　解凍血清時(shí)，請隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。

　　請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會(huì )變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩定的成分也會(huì )因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。

　　血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。

　　若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì )造成沉淀物的增多。

　　8、如何評估ES細胞合格的胎牛血清?

　　使用D3 ES細胞。這是一個(gè)對于胎牛血清中生長(cháng)促進(jìn)、生長(cháng)抑制和分化因子非常敏感的細胞系。

　　相關(guān)生長(cháng)效率分析：

　　當ES細胞以非常低的密度傳入包含10％胎牛血清的生長(cháng)培養基中，檢測啟動(dòng)和支持ES細胞克隆的能力。

　　細胞毒分析：當以非常低的密度傳入包含30％胎牛血清的生長(cháng)培養基中，檢測ES細胞和feeder細胞的生長(cháng)能力。

　　相關(guān)形態(tài)學(xué)和分化分析：檢測胎牛血清支持未分化ES細胞克隆的能力。通過(guò)堿性磷酸酶活性評估分化程度。未分化的ES細胞小顏色深紅粉紅，分化的細胞較大，豐滿(mǎn)，顏色較淺。所有的分析在沒(méi)有ESGRO的情況下進(jìn)行，培養基中出現ESGRO會(huì )掩蓋由胎牛血清所導致的問(wèn)題。培養發(fā)現大約8批血清中有1批可以用來(lái)培養ES細胞。