培養基生產(chǎn)和使用常見(jiàn)問(wèn)題

答：低血清培養基中酚紅的含量與普通培養基中的酚紅含量不同，不能通過(guò)肉眼觀(guān)察或通過(guò)經(jīng)驗來(lái)判定pH值，建議使用pH計進(jìn)行測定。

2. 低血清培養基的緩沖系統是什么？

答：平衡鹽一般是由無(wú)機鹽及葡萄糖組成的。平衡鹽有Hanks′系統、Earle′s系統、Dulbecco′s磷酸緩沖鹽系統等。199系列培養基、MEM系列培養基均有Hanks′系統的培養基及Earle′s系統的培養基。但是有些培養基均不是以上常規的平衡鹽系統，例如RPMI 1640培養基、F12培養基。MEM(SLM)低血清培養基的平衡鹽系統也不是常規的平衡鹽系統，該平衡鹽系統的緩沖能力強于常規平衡鹽系統的緩沖能力。

3. 谷氨酰胺溶液和碳酸氫鈉的配制方法是什么？

答：以0.2mol/L的 L-谷氨酰胺配制為例：稱(chēng)取L-谷氨酰胺2.92g，加注射用水100ml，充分攪拌混勻。用0.2μm濾膜正壓過(guò)濾除菌。溶液應在4℃下避光保存，2周內使用。

以7.5% NaHCO3的配制為例：稱(chēng)取NaHCO37.5g溶于100ml蒸餾水中過(guò)濾除菌。

4. 什么培養基中可以省去加酚紅？

答：酚紅在培養基中用作pH值的指示劑：中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。酚紅本身對生物制品質(zhì)量并不會(huì )產(chǎn)生影響，可以通過(guò)純化技術(shù)去除，但酚紅在無(wú)血清培養基可能帶來(lái)胞內鈉/鉀失衡，影響細胞生長(cháng)，當然這種作用能被血清所中和或減輕。 酚紅并不是培養基中必需的一種成分，很多國外的疫苗或抗體生產(chǎn)企業(yè)在生產(chǎn)過(guò)程中都使用無(wú)酚紅培養基。

5. 放置在冰箱中的培養基顏色會(huì )發(fā)生變化，為什么？

答：培養基保存于4℃冰箱中，培養基內CO2 會(huì )逐漸溢出，造成培養基越來(lái)越偏堿性。而培養基中酸堿指示劑(通常為phenol red)的顏色也會(huì )隨堿性增加而更偏暗紅。培養基偏堿后再用于細胞培養將造成細胞生長(cháng)停滯或死亡。培養基偏堿時(shí)，可以通入無(wú)菌過(guò)濾的CO2，以調整pH值。

6. 無(wú)血清培養與有血清培養使用的抗生素量一樣嗎？

答：當在無(wú)血清培養基中添加抗生素時(shí)，降低至少在有血清培養基中所使用濃度的50%。因為血清中的蛋白會(huì )結合和滅活一些抗生素。而在無(wú)血清培養條件下，抗生素不被滅活。