慢病毒包裝簡(jiǎn)要程序：以六孔板中的1孔為例，每個(gè)樣品需要1×10∧6個(gè)293FT細(xì)胞。1、取1.5ml滅菌EP管，加入1.5μg包裝混合質(zhì)粒和0.5μg表達(dá)質(zhì)粒以及250μl的無(wú)血清OptiMEM。輕柔混勻，室溫孵育5min。2、取1.5ml滅菌EP管，取9μl脂質(zhì)體2000l溶于250μl無(wú)血清Opti-MEMI培養(yǎng)基中。輕柔混勻，室溫孵育5min。3、將DNA溶液和脂質(zhì)體溶液輕柔混勻。室溫孵育20min4、用胰酶消化并記數(shù)293FT細(xì)胞。用含血清的DMEM培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。5...

一、自噬誘導(dǎo)劑(1)BredeldinA/Thapsigargin/Tunicamycin：模擬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(2)Carbamazepine/L-690，330/LithiumChloride（氯化鋰）：IMPase抑制劑（即Inositolmonophosphatase，肌醇單磷酸酶）(3)Earle's平衡鹽溶液：制造饑餓(4)N-Acetyl-D-sphingosine（C2-ceramide）：ClassIPI3KPathway抑制劑(5)Rapamycin：mTOR抑...

巴氏芽孢桿菌在水產(chǎn)上也算是用得比較多了，能夠肥水、凈水、降解氨氮、亞鹽等有害物質(zhì)。這些芽孢的作用大家都清楚，水質(zhì)惡化、底質(zhì)惡化等都能使用芽孢來(lái)改善，可是你知道為什么這小小的細(xì)菌，卻有這么大的用途嗎？其實(shí)上面這些用途都是芽孢的一個(gè)能力引申出來(lái)的——分解。先說(shuō)肥水，為什么芽孢能肥水？細(xì)菌也會(huì)在塘里生長(zhǎng)，不會(huì)搶奪藻類的營(yíng)養(yǎng)嗎？首先藻類是不能直接利用有機(jī)物的，像殘餌、糞便、尸體等都無(wú)法成為藻類生長(zhǎng)的助力，而芽孢會(huì)將有機(jī)質(zhì)分解為無(wú)機(jī)物，這樣植物就能直接利用這些營(yíng)養(yǎng)成分了，從而達(dá)到肥水的...

細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染情況總結(jié)如下:常見的污染如下：1、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯。仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時(shí)放氣時(shí)間足夠，壓力足夠！尤其是和儲(chǔ)存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲(chǔ)存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理2、霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無(wú)雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮...

常見菌類污染情況圖片1.桿菌常見的有大腸桿菌，長(zhǎng)度通常在2-5um左右。2.球菌常見的有葡萄球菌，直徑通常在1-2um左右。3.霉菌常見的有毛霉，菌絲寬2-10um左右，長(zhǎng)度短則幾十um，長(zhǎng)則可達(dá)幾mm。以上3種是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中常見的菌類污染，其共性是增殖快，適應(yīng)能力強(qiáng)，很難*，一般如果確認(rèn)培養(yǎng)細(xì)胞有以上污染，建議盡快丟棄，并檢查相關(guān)試劑和培養(yǎng)箱是否有污染，確認(rèn)沒有后再重新復(fù)蘇。那么細(xì)胞如果還是不幸污染了，那又該怎么辦呢？我把細(xì)胞污染分為早期和晚期兩種。早期污染是細(xì)胞狀態(tài)變差...

ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)顯示，ELISA試劑盒經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)，或*沒有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物...

無(wú)論新人還是熟手，細(xì)胞污染都是必須要面對(duì)的，那對(duì)于細(xì)胞污染，我覺得zui好的措施就是預(yù)防為主，因?yàn)榧?xì)胞一旦污染，想救是非常困難的，即便救活，細(xì)胞狀態(tài)也會(huì)差很多。所以我先來(lái)說(shuō)下我是怎么預(yù)防細(xì)胞污染的。生物安全柜是處理細(xì)胞的主要場(chǎng)所，也是細(xì)胞發(fā)生污染的主要場(chǎng)所，所以安全柜的正確使用是預(yù)防細(xì)胞污染的di一步。那么安全柜內(nèi)需要注意的小細(xì)節(jié)有哪些呢？首先，所有進(jìn)入安全柜的東西在進(jìn)入前都要用75%的酒精消毒。特別要注意的是我們的手，只要出了安全柜，再進(jìn)入安全柜前都要噴75%的酒精消毒。實(shí)...

一、肉眼觀察以下幾項(xiàng)：1.細(xì)胞瓶身：如果瓶身上沒有裂縫，正常；如果瓶身上有裂縫，則污染幾率非常大。2.培養(yǎng)基顏色：如果培養(yǎng)基顏色是紅色或者粉色，正常；如果是橙色，則可能是污染或者細(xì)胞過(guò)密；如果是黃色，則污染幾率非常大。3.培養(yǎng)基澄清度：如果培養(yǎng)基澄清，正常；如果有少許漂浮物，則可能是污染或者有細(xì)胞凋亡；如果培養(yǎng)基很渾濁，甚至出現(xiàn)絮狀物，則污染幾率非常大。二、進(jìn)行顯微鏡下觀察（通常觀察前需先靜置細(xì)胞1-2h）顯微鏡下可以清晰觀察到細(xì)胞是否有菌類污染，菌類污染通常分為桿菌、球菌和...