1、熒光免疫測定技術的概念：將試劑抗原或試劑抗體用熒光素進行標記，試劑與標本中相應的抗體或抗原反應后，測定復合物中的熒光素，這種免疫技術，稱為免疫熒光素技術。2、熒光的產生：物質吸收外界能量而進入激發(fā)狀態(tài)，在回復基態(tài)時多余的能量以電磁輻射的形式釋放，即發(fā)光，這種光稱為熒光。這種物質，稱為熒光素。由光激發(fā)所引起的熒光，為光致熒光------熒光免疫技術由化學反應所引起的熒光，為化學熒光------化學發(fā)光技術3、熒光素的熒光特性：⑴停止供能，熒光現(xiàn)象隨即終止⑵對光的吸收和熒光的...

一般我們購買商品化的primaryantibody的時候，抗體的說明書中都會給我們一個推薦的抗體使用濃度。這個濃度在一定程度上來說，是過飽和的，可以滿足大多數(shù)實驗的染色需求。但是因為是過飽和的濃度，這就帶來了一定程度的抗體浪費。而過量的抗體，也會大大提高樣本的自發(fā)熒光。從另一個角度來看，因為廠家給出的推薦濃度都是基于一個特定的樣本濃度和樣本體積，所以在一些特殊的實驗中，比如樣本濃度或樣本體積過大的實驗，推薦的濃度就無法達到飽和滴加的要求。在這樣的前提下，推薦實驗用戶針對自己的...

1.實驗進行前，無菌室及無菌操作臺(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風扇運轉10分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10分鐘以上后，再進行下一個細胞株之操作。2.無菌操作工作區(qū)域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取...

MEM細胞培養(yǎng)基細胞培養(yǎng)是實驗室里常見和基本的實驗了，但卻不是簡單的。別小看細胞培養(yǎng)，這里可蘊含著大學問。有時候細胞狀態(tài)不好，轉染、藥篩這些實驗根本就沒辦法做。影響細胞培養(yǎng)的因素很多，讓我們先從培養(yǎng)基和血清說起。經典的培養(yǎng)基有很多種，Invitrogen(GIBCO)、ThermoFisher(HyClone)、Sigma等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI1640、MEM、DMEM/F12都是應用廣泛的培養(yǎng)基。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細胞的培養(yǎng)...

一、ELISA實驗中血清的采集、處理和保存1、真空采血針采集2ml新鮮血液，加入無菌試管中。2、采血后室溫靜置1小時。3、將采集血液用離心機4℃，2500rpm離心10min，，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。4、取上清。分裝凍存?zhèn)溆茫?-8℃下，可放置保存24-48小時；-20℃下，可放置保存1個月；-70℃下，可放置保存6個月。5、根據(jù)你的實驗需要，取適量上清夜進行各種ELISA測定。大部分ELISA檢測均以血清為標本。血清標本可按常規(guī)方法采集，應注意避免溶血，紅細胞溶...

玻璃器皿的清洗在制備培養(yǎng)基的過程中，要使用一些玻璃器皿，如試管、三角瓶、培養(yǎng)皿、燒杯和吸管等。這些器皿在使用前都要根據(jù)不同的情況，經過一定的處理，洗刷干凈。有的還要進行包裝，經過滅菌等準備就緒后，才能使用。1、新購的玻璃器皿除去包裝沾染的污垢后，先用熱肥皂水刷洗，流水沖凈，再浸泡于１～２％的工業(yè)鹽酸中數(shù)小時，使游離的堿性物質除去，再以流水沖凈。對容量較大的器皿，如大燒瓶、量筒等，洗凈后注入濃鹽酸少許，轉動容器使其內部表面均沾有鹽酸，數(shù)分鐘后傾去鹽酸，再以流水沖凈，倒置于洗滌架...

出現(xiàn)問題出現(xiàn)問題的原因解決辦法曲線OD值不正常試劑盒未回溫試劑盒回溫到25℃溫度控制不好控制正確溫度孵育時間不準確控制孵育時間洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數(shù)增加洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干陽光直射，對著風直接吹避風避光酶標儀的波長錯誤酶標儀的波長450nm抗體的稀釋錯誤正確的稀釋抗體水質問題用礦泉水代替白板洗滌液配制錯誤正確的配制洗滌液少加液體（抗體、酶標記物、A液、B液）正確的步驟加液體錯加液體無梯度標準品也污染換標準品點板OD值不正?？刂茰囟葧r間在做一...

試劑，儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異，國內醫(yī)學檢驗一般均用板式點。本文將敘述板式ELISA各個操作步驟的注意要點，珠式、管式及磁性球ELSIA，國外試劑均與特殊儀器配合應用，兩者均有詳細的使用說明，嚴格遵照規(guī)定操作，必能得出準確的結果。一、標本的采取和保存可用作ELISA測定的標本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進...